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感受態細胞 X33 畢赤酵母PEG感受態細胞 電極杯 代替電轉
 
   
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感受態細胞 X33 畢赤酵母PEG感受態細胞 電極杯 代替電轉

  • 貨  號:R09037
  • 品  牌:瑞楚生物REBIO
  • 銷售價: ¥850.00
購買數量:
  (庫存442)
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1 產品介紹

    本試劑盒包括酵母感受態細胞、Solution 1Solution 2。其中酵母感受態細胞是用于轉化的細胞,需-70度低溫保存;Solution 1Solution2為轉化時使用的試劑,均為無菌,需-20度保存,使用時解凍即可。本酵母感受態細胞采用專利技術制備的感受態,有別于傳統山梨醇制備的感受態細胞,并配有Solution 1Solution 2,可直接用于熱擊法轉化,而不需要使用電轉儀和電擊杯。本方法是電擊法的替代方法,也避免了LiCl方法需要現制備感受細胞的繁瑣。轉化效率可以達到102-103cfu/ug線性化DNA,經本公司反復驗證-80保存6個月不影響轉化效率。

2 轉化步驟

2.1 線性化質粒片段的制備

    取過夜培養的質粒菌種3ml,使用質粒抽提試劑盒抽提質粒,最后溶解于50ulTE或水中。將所有的質粒片段在200μl的體系中酶切線性化。用酚氯仿試劑去除蛋白并且濃縮片段至20ul體系中。多次制備且保證有大于50μg的質粒片段。

2.2 轉化

2.2.1直接加于凍結的酵母細胞中以獲得最大轉化率; (注意加入至凍結的細胞中,而不是解凍的細胞中);

2.2.2. 加入后迅速放入37水浴孵育5min,中間混合樣品12次;

2.2.3. 取出離心管,加入1.0ml Solution 1,徹底混勻;(注意可以彈或移液器輕輕混合,不可用移液器劇烈來回混合也不可用渦旋振蕩器) 

2.2.4. 30水浴孵育1h

2.2.5. 室溫下2000g離心10min,去除上清液,菌體沉淀重懸于0.8ml Solution 2中;

2.2.6. 離心樣品,去除上清液,輕微操作將樣品重懸于0.2ml Solution 2中;

2.2.7. 將所有轉化液鋪于選擇性平板(例如MDZeocin抗性板,于30孵育34天后,鑒定;

 

 

 

 

3 注意事項

1. 轉化步驟1DNA要加入至凍結的細胞中,注意不可解凍細胞后再加入DNA

2. 轉化步驟2中混合樣品是必需的;

3. 轉化步驟3中要充分混勻,但不可劇烈混合;

4. 所有混合細胞均要輕柔;

5. 感受態的使用范圍

   本公司感受態細胞有別于電轉化, 轉化效率不及電轉化效率高,因此需要制備足量的DNA量。感受態細胞的用途也與相關文獻報道有異。

X33感受態細胞

只適合于pPICA/B/CpPICαA/B/CZeocin篩選的質粒

GS115感受態細胞

只適合于pPIC3.5KpPIC9.0K等組氨酸缺陷性篩選的質粒

KM71H感受態細胞

只適合于pPIC3.5KpPIC9.0K等組氨酸缺陷性篩選的質粒

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